使用酶標(biāo)分析儀檢測(cè)酸奶中三聚氰胺的操作步驟。首先將三聚氰胺酶標(biāo)記物、樣品提取液和標(biāo)準(zhǔn)品加入涂有三聚氰胺抗體的微孔，并用提取液搖勻測(cè)定。在30分鐘的孵育過(guò)程中，樣品提取液中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)，與微孔中的三聚氰胺抗體結(jié)合。孵育30分鐘后，微孔中所有未結(jié)合的三聚氰胺和三聚氰胺酶標(biāo)記物都被沖洗掉。用去離子水洗滌后，在每孔中加入一種清晰的底物溶液，結(jié)合酶標(biāo)儀將無(wú)色底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色物質(zhì)。孵育30分鐘后停止反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深度讀取數(shù)據(jù)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)顏色，得到樣品中三聚氰胺的濃度值。

一、酶標(biāo)儀檢測(cè)酸奶中三聚氰胺需要準(zhǔn)備的材料：

1、蒸餾水或去離子水

2、可吸取50ul和100ul的移液器及吸頭

3、4000轉(zhuǎn)離心機(jī)

4、吸水紙或相當(dāng)?shù)奈牧?/span>

5、450nm的酶標(biāo)儀

6、計(jì)時(shí)器

7、20mM PBS：需自行配制

8、清洗液：需自行配制

二、酶標(biāo)儀檢測(cè)酸奶中三聚氰胺試劑配制：

1、20mM PBS： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾水定容至1000ml

2、清 洗 液： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20

三、酶標(biāo)儀檢測(cè)酸奶中三聚氰胺樣品的前處理：    酸奶（稀釋倍數(shù)：25）

1、取2ml酸奶；

2、加入8ml的20Mmpbs，混勻，測(cè)定PH值（ph=5.6左右）；

3、加入180ul 0.1MNaOH,將ph值調(diào)整到7左右；

4、取200ul加入到0.8ml的10%甲醇/20mMPBS中，混勻，取150ul測(cè)定；

四、酶標(biāo)儀檢測(cè)酸奶中三聚氰胺測(cè)定過(guò)程：

1、將所有試劑及樣品回升至室溫20-28℃，但不要放置超過(guò)24小時(shí)；

2、從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條固定在微孔板架上，未使用的孔條與干燥劑一同放入密封袋中保存；

3、吸取150ul標(biāo)準(zhǔn)品、樣品到對(duì)應(yīng)微孔中，必須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取，避免交叉污染。加入50ul三聚氰胺酶標(biāo)記物到每個(gè)小孔中；

4、輕輕搖板60秒，20-28攝氏度下孵育30分鐘；

5、將微孔中的溶液倒入水槽中，用清洗液完全充滿(mǎn)微孔，震蕩后倒掉，重復(fù)三次，總共四次洗板；

6、等一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻轉(zhuǎn)微孔板在吸水紙上拍干；

7、每個(gè)微孔中加入100ul底物溶液；

8、20-28攝氏度下，孵育30分鐘；

9、每個(gè)微孔中加入100ul停止液；

10、使用萊恩德酶標(biāo)儀450nm下讀板